原果胶(PP)含量试剂盒,微板法

原果胶(PP)含量试剂盒,微板法

原果胶(PP)含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 原果胶含量试剂盒说明书 （货号：WS3070W 微板法 96 样） 一、产品简介： 果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸等 形式广泛分布于植物果实、根茎和叶中。果胶和纤维素以及金属离子等物质相结合形成不 溶于水的原果胶，他的存在使果实显得坚实、脆硬。 本试剂盒先提取得到原果胶，采用咔唑比色法测定原果胶含量。即原果胶在稀酸中水解 为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应，生成紫 红色物质，经光谱扫描该物质在 530nm 处有吸收峰，颜色深浅与果胶含量成正比， 进而得原果胶含量。 二、试剂盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 120 mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 1.5mL×1 支 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、乙醇、浓硫酸、研钵。 四、原果胶含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 1 取 0.1g 组织（烘干且过筛后的粉末组织可取 0.01g），加 1.5mL 的 80%乙醇，研磨匀 浆，85℃水浴 10min（及时补充 80%乙醇至 1mL），取出流水冷却后，8000rpm，25℃ 离心 10min，弃上清，留沉淀， 2 向沉淀中加入 1mL 的 80%乙醇，混匀，85℃水浴 10min（及时补充 80%乙醇至 1mL）， 取出流水冷却后，8000rpm，25℃离心 10min，弃上清，留沉淀。 ③ 再向沉淀中加入 1 mL 蒸馏水，混匀，50℃水浴 30min,流水冷却至室温，8000rpm，25℃ 离心 10min，弃上清，留沉淀。 ④ 向沉淀中加入 1mL 提取液，混匀，95℃水浴 60min，流水冷却至室温，8000rpm，25℃ 离心 10min，取上清液待测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长为 530nm； ② 可取两个样本做适当梯度的稀释（如 4 倍，即 1 份上清液+3 份蒸馏水），确定 适合本次实验的稀释倍数 D。 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称 （µL） 测定管 空白管 （仅做一次） 样本 70 蒸馏水 70 浓硫酸 420 420 可用封口膜缠紧，85℃水浴 15min 后， 流水冷却至室温。本试剂盒仅供科研使用 2 试剂一 14 14 混匀，室温（25℃）暗处反应 30min（间隔 10min 混匀一次），立即取出 200µL 于 96 孔中，于 530nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定-A 空白。 【注】：1、浓硫酸必须是分析纯级别，且不能长期开口放置，否则影响显色结果。另外浓硫酸具有 强腐蚀性，操作时需特别注意，85℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。 2、显色反应必须在暗处反应，否则颜色很快消失或者变淡，影响吸光值。 3、若 A 测定管值大于 1.8，可用蒸馏水稀释样本即待检测上清液，则稀释倍数 D 需代入公 式计算；或若 A 值再零附近可增加样本取样质量 W。 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 1.8749x -0.0018，x 为标准品浓度（mg/mL），y 是△A。 2、原果胶含量(mg /g 重量)= [(ΔA +0.0018) ÷1.8749×V1]÷ (W×V1÷V)×D =0.53×(ΔA +0.0018)÷W×D W---样本重量，g； V---加入提取液体积，1mL； V1---加入样本体积，0.07mL； D---稀释倍数。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（0.5mg/mL）：临用前向标准品中加入 2mL 蒸馏水（现配现用）。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5. mg/mL。 也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。