还原糖含量试剂盒

还原糖含量试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 还原糖含量试剂盒说明书 （货号：WS2050F 分光法 48 样） 一、产品简介： 还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄 糖、果糖和麦芽糖等，是最常见的单糖和双糖。 在碱性条件下，DNS 试剂与还原糖共热生成棕红色氨基化合物，经过 480nm 到 540nm 波长扫描发现在 500nm 有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与 500nm 吸光 度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样品中还原糖的量。 二、测试盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、可调式移液器、研钵、乙醇。 四、还原糖含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取 0.1g 样本（若是干样，如烘干烟叶等可取 0.05g；若是水分充足的样本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自备：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中），冰浴匀浆，倒入 有盖离心管中，再用 80%乙醇冲洗研钵并转移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液终体积 定容为 1.5mL（若用自动研磨机可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜缠紧，防止液体散失，且间隔 2min 振荡混匀一次），冷却后（若有损失，可加 80%乙醇补齐至 1.5mL），12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取 ② 液体样本： 澄清的液体样本直接检测，若浑浊则需 12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 2、上机检测： 1 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。 2 调节水浴锅至 95℃。 ③ 上清液稀释：可先取 2 个样本检测，确定适合本批样本的稀释浓度 D：叶片类样本可 稀释 10 倍，含糖量高的果肉类样本可稀释 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中加入下列试剂： 试剂（μL） 测定管 空白管（仅做一次） 样本 100 蒸馏水 100 试剂一 100 100 混匀，在 95℃水浴中加热 10min（盖紧封口，防止水分散失）， 取出后立即过冷水冷却至室温。 蒸馏水 1000 1000 混匀，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中，500nm 读取吸光值 A， ΔA=A 测定-A 空白。 【注】：若ΔA 值大于 1.5，样本可用蒸馏水再稀释，稀释倍数 D 代入公式计算。本试剂盒仅供科研使用 五、结果计算： 1、 标准曲线方程为 y =1.3936x-0.0296；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值ΔA。 2、按样本重量计算： 还原糖(mg/g 重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×D =1.076×(ΔA+0.0296)÷W×D 3、按质量分数（%）计算： 还原糖(%重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×10-3× =[0.1076×(ΔA+0.0296)÷W×D]% 4、按液体体积计算： 还原糖(mg/mL)=(ΔA+0.0296)÷1.3936×D=0.7176×(ΔA+0.0296)×D V---样品提取液总体积，1.5mL； V1---测定时所取样本的体积，0.1mL； W---样本质量，g； D---自行稀释倍数，未稀释即为 1。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。 2