土壤硝态氮试剂盒-国标法,微板法

土壤硝态氮试剂盒-国标法,微板法

土壤硝态氮试剂盒-国标法,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤硝态氮试剂盒说明书 （货号：WS9130W 微板法 96 样） 一、产品简介： 硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为 硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产 量与品质。 土壤浸出液中硝酸根离子在 220nm 有明显光吸收而在 275nm 波长处没有吸收峰，通 过测定土壤浸出液在 275nm 处的吸光度，乘以一个校正因素 f 以消除有机质在 220nm 波 长处的光吸收干扰。进而得到土壤中硝态氮的含量。 二、试剂盒的组成和配制： 试剂名称 规格 试剂名称保存要求 备注 试剂一 粉剂 g×1 瓶 4℃保存 临用前先加 50mL 的蒸馏水，全部 转移到量筒（自备）中，再加蒸馏 水定容至 600mL。 标准品 液体×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔 UV 板（用于紫外光波长下的测定）、蒸馏水、天平、常温离心机、量筒、 振荡培养箱。 四、土壤硝态氮的测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！ 1、样本处理 取约 1g 新鲜土样，若鲜土呈松散状，尽可能过 40 目筛网备用。 【注】： 1、土壤经风干或烘干易引起 NO3－ -N 变化，故一般都用新鲜土样测定。 2、硝酸根为阴离子，不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很易在土壤内部移动，在土壤剖面上 下层移动频繁，因此测定硝态氮时注意采样深度。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上。 ② 在 5mLEP 管中加入： 测定管 空白管（仅做一次） 鲜土（g） 1 试剂一（mL） 5 5 25℃，220rpm/min 往复式振荡培养 1h， 混匀（成浑浊液状态）用慢速定性滤纸过滤，澄清的滤液待测。 取 200μL 滤液至 96 孔板中，220nm 分别读吸光值 A1、A2，再于 275nm 分别读吸光值 A3、A4； A 测定管=A1-(A3×f)，A 空白管=A2-(A4×f) △A=A 测定管-A 空白管 注：f 为矫正因素 2.23。 【注】若测定管于 220nm 的 A 值大于 1，需用试剂一稀释滤液使 A220nm 的值在 1 以内， 稀释倍数 D 需代入公式计算。本试剂盒仅供科研使用 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 0.1305x - 0.0017；x 为标准品浓度（μg/mL），y 为吸光值△A。 2、土壤硝态氮(NO3 --N)含量(mg/kg 鲜土)=(△A+0.0017)÷0.1305×V÷W×D =38.32×(△A+0.0017)÷W×D V---反应总体积，5mL； D---稀释倍数，未稀释即为 1； W---实际称取鲜土质量，g。 【注】：*低检出限为 0.5μg/g。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（100μg/mL）。 2 用试剂一把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. μg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。 3 直接取不同浓度的标准品 200μL 至 96 孔板中，分别于 220nm 和 275nm 读吸光值 A1、 A2，A 标准品=A1-(A2×f)。根据结果即可制作标准曲线。 2