土壤淀粉mei试剂盒,微板法

土壤淀粉mei试剂盒,微板法

土壤淀粉mei试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤淀*酶（Soil Amylase，S-AL）试剂盒说明书 （货号：WS8130W 微板法 48 样） 一、产品简介： 土壤中的淀*酶主要来自于微生物，是一种重要的酶制剂。淀*酶可水解淀粉产生还原 糖，本试剂盒采用 3,5-二硝基水杨酸与终产物还原糖反应生成棕红色物质，在 540nm 处有 特征吸收峰，进而得到土壤淀*酶活性。 二、测试盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前加入 60ml 试剂二,可 80℃水浴， 搅拌至溶解，待用。 试剂二 液体 120mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 12mL×EP 管 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、天平、水浴锅、低温离心机、甲苯。 四、土壤淀*酶（S-AL）活性检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本处理： 取新鲜土样或风干土壤，先粗研磨，过 40 目筛网，待测备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 培养：在 EP 管依次加入： 试剂（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.1 0.1 甲苯 40 40 25℃静置 15min 试剂一 1000 试剂二 1000 充分混匀，37℃培养 1h，12000rpm，25℃离心 10min，上清液待用 ② 酶标仪预热 30min 以上，调节波长为 540nm。 ③ 显色反应：在 EP 管中依次加入： 上清液 200 200 试剂三 100 100 混匀，95℃水浴 5min，待冷却后，取 200μL 于 96 孔板中， 在 540nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管。 【注】若△A 在零附近徘徊，可增加土样质量（如增至 0.2g），或延长培养时间（如增至 3h 或更长）， 则改变后的土样质量和反应时间 T 代入公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 2.5454x - 0.0704；x 为标准品质量（mg/mL），y 为△A。本试剂盒仅供科研使用 2、酶活单位定义：每克土样每小时催化生成 1μg 葡萄糖为一个酶活力单位。 S-AL(μg/h/g 土样)=[(△A+0.0704)÷ 2.5454×103×V]÷W÷T =408.6×(△A+0.0704)÷W V---反应总体积，1040μL=1.04mL； T--反应时间，1h； W--土壤样本实际取样量，g； 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. 0.6. 0.7.mg/mL。 也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 在显色反应阶段，按照测定管加样表操作，依据结果即可制作标准曲线。 2