纤维素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶试剂盒微板法

纤维素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶试剂盒微板法

纤维素酶(S-CL)β-1,4葡聚糖酶试剂盒微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤纤维素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性测定试剂盒说明书 (货号:WS8030W 微板法 96 样) 一、产品简介： 纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在土壤纤维素酶作用下，可 以催化纤维素水解生成纤维二糖、葡萄糖等还原糖，所以，纤维素酶是碳素循环中的一个 重要酶。本试剂盒采用3,5-二硝基水杨酸与终产物还原糖反应生成棕红色物质，在540nm 处有特征吸收峰，进而得到土壤纤维素酶活性。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉体 mg×2 瓶 4℃保存 临用前每瓶加入 55mL 试剂二， 可 80℃水浴，搅拌至溶解，待用。 试剂二 液体 110mL×2 瓶 4℃保存 试剂三 液体 20mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅或恒温振荡培养箱、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤纤维素酶（S-CL）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 培养：在 EP 管依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.3-0.5 0.3-0.5 试剂一 1000 试剂二 1000 充分混匀，40℃培养 24 小时（振荡培养或间隔一段时间手动振 荡混匀几下），12000rpm，25℃离心 10min，上清液待用 ② 酶标仪预热 30min 以上，调节波长为 540nm。 ③ 显色反应：在 EP 管中依次加入： 上清液 200 200 试剂三 100 100 混匀，95℃水浴 5min，待冷却后，取 200μL 于 96 孔板中， 在 540nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管。 【注】：1.若ΔA 较小，可延长 40℃的孵育时间 T（如 48 小时或更长），或增加土样质 量 W。则改变后的 V1 或土壤重量 W 需代入计算公式重新计算。 2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1，③歩显色反应步骤中的上清液可用蒸馏 水稀释，则稀释倍数 D 代入公式计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 15.161x - 0.0701；x 为标准品质量（mg），y 为△A。 2、单位定义：每天每克土样中产生 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。 土壤纤维素酶(S-CL)活力(μg/d/g 土样)=[(ΔA+0.0701)÷15.161×103×(V÷V1)]÷W÷T =329.8×(ΔA+0.0701)÷W V---反应总体积，1000μL； V1---显色反应中上清液体积，200μL； T---反应时间，24h=1d； W---土壤样本实际取样量，g。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天 内用且-20℃保存）。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. mg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。 3 在显色反应阶段，按照测定管加样表操作，依据结果即可制作标准曲线。