土壤精an酸脱氨酶活性测定试剂盒,微板法

土壤精an酸脱氨酶活性测定试剂盒,微板法

土壤精an酸脱氨酶活性测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤精*酸脱氨酶活性测定试剂盒说明书 （货号：WS0530W 微板法 48 样） 一、产品简介： 氮素是限制植物生长发育的主要营养元素之一，土壤氮素是植物氮素营养的主要来源。 其中土壤精*酸脱氨酶也与土壤中氮转化有着密切关系。 本试剂盒利用精*酸脱氨酶水解精*酸生成NH3-N，该产物在强碱性介质中与次氯酸盐 和*酚反应，生成水溶性染料靛酚蓝，通过检测生成的有色物质在630nm的光吸收峰， 进而得出土壤精*酸脱氨酶活力大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 粉剂 mg×2 瓶 4℃保存 临用前每瓶加入 18mL 蒸馏水，充分溶 解备用，用不完的试剂仍 4℃保存； 试剂二 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 避光保存。 试剂四 液体 3mL×1 瓶 4℃保存 试剂五 A：液体 3.5mL×2 瓶 B：液体μL×1 支 4℃保存 临用前取 30μL 的 B 液进一瓶 A 液中， 混匀后作为试剂五使用。混匀后的试 剂五一周内用完。 标准品 液体 1 mL×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅或恒温培养箱、离心机、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤精*酸脱氨酶活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本的制备： 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网，备用。 2、上机检测： ① 培养：取 EP 管依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样(g) 0.5 0.5 试剂一 600 蒸馏水 600 混匀，放入 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 3 小时 试剂二 600 600 震荡提取 30min，8000rpm，25℃离心 5min，取上清液。 ② 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 630nm。 ③ 显色反应：在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 上清液 15 15本试剂盒仅供科研使用 2 蒸馏水 45 45 试剂三 60 60 试剂四 30 30 试剂五 60 60 混匀，37℃放置 20min 后，于 630nm 读取吸光值 A， ΔA=A 测定管-A 对照管（每个样本做一个自身对照）。 【注】1. 试剂三和四和五需分开加，不能事先混匀。 2. 若ΔA 值较小，可增加 37℃孵育时间 T（如由 3 小时增至 6 小时或更多）或在显色反应阶 段增加上清液量 V1(如增至 30μL，则蒸馏水体积相应减少)；则改变后的 T 和 V1 需代入 计算公式重新计算。 3. 若 A 测定的值大于 1.5，可在显色反应阶段减少上清液的量 V1(如减至 5μL，则蒸馏水体 积相应增加)；则改变后的上清液体积 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 5.0935x - 0.0031；x 为标准品质量（μg），y 为吸光值ΔA 。 2、土壤酶活定义：每天每克土样中产生 1μg 的 NH3-N 定义为一个酶活力单位。 土壤精*酸脱氨酶活力(μg/d/g 土样)=(ΔA+0.0031)÷5.0935×(V÷V1)÷W÷T =125.7×(ΔA+0.0031)÷W V---反应总体积，1200μL； V1---显色反应中上清液体积，15μL； T---反应时间，3h=1/8d； W---土壤样本实际取样质量，g。 附：标准曲线制作过程： 1 把标准品母液（1mg/mL），用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0，2，4，6，8， 10. μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。 2 在显色反应阶段，按照测定管加样表操作，依据结果即可制作标准曲线。