土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)试剂盒,微板法

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)试剂盒,微板法

土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤芳基硫酸酯酶（Solid-aryl sulfatase，S-ASF）试剂盒说明书 （货号：WS6330W 微板法 48 样） 一、产品简介： 土壤芳基硫酸酯酶（EC 3.1.6.1）来自于土壤微生物，能酶促土壤有机硫化物转化为植 物可吸收的无机态硫，在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用，是 反映土壤质量的一个重要生物学指标。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基*酚（PNP），后者在 410nm 有特征光吸收。通过测定 410nm 光吸收增加速率，即可计算 S-ASF 酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂 mg×2 支 -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部， 每支加 1.5mL 试剂二溶解备用。 试剂二 液体 23mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液 25mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、甲苯（自备）和蒸馏水。 四、土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本的制备： 取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 410nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.05 0.05 甲苯 10 10 振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 10min 试剂一 50 试剂二 200 250 混匀， 37℃振荡反应 1h 试剂三 250 250 混匀，室温静置 2min，12000rpm 室温离心 10min，取 200μL 上清液于 96 孔板中，于 410nm 下读取吸光值 A，△A= A 测定- A 对照（每个样 本需做一个自身对照）。 【注】：1.若ΔA 过小，可以增加土样量（如至 0.1g）或延长保温时间（如：2h 或更长），重新调整 的样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 2.若 A 测定超过 1.5，可取 100μL 上清液加 100μL 蒸馏水（相当于稀释 2 倍）于 96 孔板中 检测，或者减少土样量，或者降低保温时间（如：10min），则稀释倍数 D 和重新调整的本试剂盒仅供科研使用 2 样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 0.1645x - 0.0011；x 为标准品质量（μg），y 为吸光值ΔA。 2、单位定义：每小时每克土样中产生 1μg 对-硝基*酚（PNP）定义为一个酶活力单位。 土壤芳基硫酸酯酶(S-ASF)活性(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0011)÷0.1645÷W÷T =6.08×(ΔA+0.0011)÷W T---反应时间，1h； W---实际称取干土质量； PNP 相对分子质量---139.11。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 在 EP 管加入：10μL 标准品+10μL 甲苯+240μL 试剂二+250μL 试剂三，混匀，取 200μL 至 96 孔板中，于 410nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。