土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤α-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase）测定试剂盒说明书 （货号：WS3330W 微板法 48 样） 一、产品简介： α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶，存在于微生物等生物体，促使非 还原末端α-D-木糖残基的水解，释放出α-D-木糖。 土壤中α-木糖苷酶催化对硝基*酚-α-D-木糖苷产生对硝基*酚（PNP），该产物在 405nm 处有特征吸收峰，通过测定 405nm 光吸收增加速率，即可计算土壤α-木糖苷酶活 性。 二、试剂盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂 mg×1 支 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部， 再加 1.4mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液 22mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、蒸馏水。 四、土壤α-木糖苷酶活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本的制备： 取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称 测定管 对照管 土样（g） 0.1 0.1 试剂一（μL） 25 蒸馏水 25 试剂二（μL） 55 55 混匀， 45℃振荡反应 30min 试剂三（μL） 220 220 混匀，12000rpm，离心 10min，取上清液 200μL 于 96 孔板中，405nm 下读取吸光值 A，△A= A 测定- A 对照（每个样本需做一个自身对照）。 【注】：1.若ΔA 过小，可以增加土样量或延长保温时间（如：60min 或更长），重新调整的 样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 2.若 A 测定超过 1.5，可以减少土样量或降低保温时间（如：10min），重新调整的 样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y=0.2647x-0.0058；x 为标准品质量（μg），y 为吸光值ΔA。 2、单位定义：每小时每克土样中产生 1μg 对-硝基*酚（PNP）定义为一个酶活力单位。 土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0058)÷0.2647÷W÷T=7.56×(ΔA+0.0058)÷W T---反应时间，30min=0.5h； W---实际称取干土质量，g； PNP 相对分子质量---139.11。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 在 EP 管加入：20μL 标准品+5μL 蒸馏水+55μL 试剂二+220μL 试剂三，混匀，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。