土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒,微板法

土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒,微板法

土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤锰过氧化物酶（S-Mnp）试剂盒说明书 （货号：WS0330W 微板法 48 样） 一、产品简介： 锰过氧化物酶（EC1.11.1.13，Mnp）是真菌分泌的一种糖基化的胞外蛋白，含亚铁血红 素的过氧化物酶，主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌这两个担子真菌中，属于木 质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和环境中其他一些抗性物质，如腐殖质酸和包 括多环芳烃在内的多种有机污染物等。 土壤锰过氧化物酶（S-Mnp）在 Mn2+存在的条件下，将二甲氧基*酚（DMP）氧化生成 的产物在 470nm 处有特征吸收峰。通过检测该产物在 470nm 处的增加速率，即可得到 Mnp 酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉剂×1 瓶 4℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部，再加 8mL 无水乙醇溶解备用。 试剂三 粉剂×1 瓶 4℃保存 用前甩几下使粉剂落入底部，再加 3mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂四 液体×1 支 4℃保存 用前甩几下使液体落入底部，准备 三个新的 EP 管：每管中加入 2µL 液体，再加 1mL 蒸馏水混匀备用。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液器、天平、恒温震荡培养箱。 四、土壤锰过氧化物酶（S-Mnp)活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： 1 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 470nm。 2 所有试剂至常温状态。 3 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.05 0.05 试剂一 200 340 试剂二 140 试剂三 20 20 试剂四 40 40 充分混匀，30℃震荡反应 2h 后，于 12000rpm，4℃离心 10min， 取 200μL 于 96 孔板中，读取 470nm 处吸光值 A，△A=A 测定管 - A 对照管（每个样本需做一个自身对照）。 【注】若△A 值较低，可加大土壤样本量或者延长反应时间，则改变后的样本质量 W 和反应时间本试剂盒仅供科研使用 2 T 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 酶活性定义：每克土壤每天氧化 1nmol 的 DMP 所需酶量为一个酶活力单位。 S-MnP 活性(nmol/d/g 土样)=(△A÷ε÷d)×109×V÷W÷T=174.5×△A÷W ε---DMP 被氧化的产物的摩尔消光系数：55000L/mol/cm； d---96 孔板光径，0.5cm； V---反应总体积，4×10-4 L； W---样本质量，g； T---反应时间，2h=1/12d