糜蛋bai酶试剂盒

糜蛋bai酶试剂盒

糜蛋bai酶试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 糜蛋*酶/胰凝乳*白酶（Chymotrypsin）试剂盒说明书 (货号：WS1121F 分光法 24 样) 一、产品简介： 糜*白酶（EC 3.4.21.1）又称胰凝*蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，具有肽链 内切酶的作用，通过切断蛋白质肽链中酪*酸、苯丙*酸的羧端肽链作用，专一水解羧端芳 香族氨基酸。临床上糜*白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手 术后伤口愈合。 糜蛋*酶可催化酪蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝色； 其颜色的深浅与胃*白酶活性呈正比。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前加 2.8mL 的试剂四，再加 5.6mL 的试剂二沸水加热，涡旋 振荡（反复几次）直到全部溶解， 再加 24mL 的试剂二混匀，配置 完的试剂 4℃保存，三天内用完。 试剂二 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 5mL×1 瓶 4℃保存 试剂四 液体 8mL×1 瓶 4℃保存 试剂五 液体 10mL×1 瓶 4℃保存 标准品 液体 2mL×1 支 4℃保存 质控品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若用该试剂，则用前加 1mL 蒸馏 水溶解，再用蒸馏水稀释 10 倍， 即 0.1mg/mL 的糜*白酶。 三、所需的主要仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、天平 四、糜*白酶活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×4000rpm 离心 5min，取 上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取 ② 液体样本：液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后，4℃×4000rpm，离心 5min， 取上清液检测。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温。本试剂盒仅供科研使用 2 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 样本 100 100 试剂一 500 试剂三 100 37℃孵育 10min 试剂三 100 试剂一 500 37℃孵育 10min，4000rpm 室温离心 10min，上清液待测 ④ 显色反应，在 EP 管中： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 标准管 （只做一次） 空白管 （只做一次） 上清液 200 200 标准品 200 提取液 200 蒸馏水 200 200 200 200 试剂四 100 100 100 100 试剂五 200 200 200 200 37℃孵育 20min 后（若浑浊则室温 4000rpm 离心 5min），全部上清液转移至 1mL 玻璃比色皿中，于 680nm 处读取各管的吸光值 A。ΔA=A 测定-A 对照。 【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如 37℃孵育 10min 延长至 20min）或增加样本 量 V1（如增至 200μL，则试剂一相应减少），则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计 算公式重新计算。 2. 若 A 测定值大于 1.5，可以减少样本量 V1（如减至 50μL，用提取液相应补充），则改变后 的样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、按样本蛋白浓度计算： 酶活定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)。 糜*白酶（U/mg prot）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷（A 标准-A 空白）÷Cpr 2、按样本鲜重计算： 酶活定义：37℃每 g 组织每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)。 糜蛋*酶（U/g 鲜重）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷（A 标准-A 空白）÷W 3、液体中酶活力的计算: 酶活定义：37℃每毫升液体每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)。 糜蛋白*（U/mL）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷V1÷T =35×ΔA÷（A 标准-A 空白） V---加入提取液体积，1 mL； V1---加入样本体积，0.1mL； V2---第③歩反应总体积，0.7mL； T---反应时间，10min； C 标准---50μg/mL； W---样本质量，g； Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒