肌酐 (Cr) 含量试剂盒，微板法

肌酐 (Cr) 含量试剂盒，微板法

肌酐 (Cr) 含量试剂盒，微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 肌酐（CRE）含量（肌氨酸氧化酶法）检测试剂盒说明书 （货号：WS4021W 微板法 96 样） 一、产品简介： 肌酐（Creatinine，CRE）是肌肉代谢的产物，主要通过肾小球滤过排出体外。在正常情况下， 体内肌酐的含量基本稳定。血液中的肌酐浓度可作为检测肾小球滤过功能的指标之一。 本试剂盒利用肌酐酶特异作用于肌酐生成肌酸，肌酸在肌酸酶和肌氨酸氧化酶的相继作用下 生成过氧化氢，过氧化氢与显色剂反应呈现紫色，该有色物质在546nm有吸收峰，进而计 算得到肌酐含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要 求 备注 试剂一 液体 18mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 标准管 粉体 2mg×1 支 4℃保存 用前甩几下使粉体落入底部，再加 1mL蒸馏水溶解即标准品浓度为 2mg/mL，再用蒸馏水稀释40倍 （1:39份水）成0.05mg/mL，即 442μmol/L的肌酐标准品待检液。 三、所需仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。 四、肌酐含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本 和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 取约 0.1g 组织样本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部转移到 EP 管中，12000rpm，常温 离心 10min，上清液待测。 ② 液体样品：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min，设置温度在 37℃，设定波长到 546nm。 ② 做实验前选取 2 个样本，找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。 ③ 所有试剂解冻至室温，在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 空白管 （仅做一次） 标准管 （仅做一次） 样本 6 蒸馏水 6 标准品 6 试剂一 180 180 180本试剂盒仅供科研使用 2 混匀，37℃孵育 5min，于 546nm 处读取吸光值 A1。 试剂二 60 60 60 混匀，37℃孵育 5min 后于 546nm 处读取吸光值 A2， △A=A2-A1。 【注】：1. 测定管的 A 大于 0.5，须用蒸馏水对样本进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。 2. 若△A 的值小于 0.005，可增加样本加样体积 V1（如由 6μL 增至 10μL 或更多，则试剂二相应 减少，空白管和标准管变化同测定管），或增加样本取样质量 W；则改变后的 V1 和 W 需代入公 式重新计算。 五、结果计算： 1、按照质量计算： 肌酐含量(nmol/g)=(C 标准×V2)×(△A 测定-△A 空白)÷(△A 标准-△A 空白)÷(V1÷V×W)×D =442×(△A 测定-△A 空白)÷(△A 标准-△A 空白)÷W×D 2、按照体积计算： 肌酐含量(μmol/L)=(C 标准×V2)×(△A 测定-△A 空白)÷(△A 标准-△A 空白)÷V1×D =442×(△A 测定-△A 空白)÷(△A 标准-△A 空白)×D C 标准---肌酐标品，0.05mg/mL=442μmol/L=442nmol/mL；Mr---肌酐分子量，113； V1---加入样本体积，0.006mL； V2---加入标准品体积，0.006mL； V---提取液体积，1mL； W---质量，g； D---稀释倍数，未稀释即为 1。