γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒

γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒

γ-氨基丁酸(GABA)含量试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 γ-氨基丁酸（GABA）含量试剂盒说明书 （货号：WS6011F 分光法 48 样） 一、产品简介： 4-氨基丁酸（GABA）广泛分布在动植物体中。在动物体内 GABA 几乎只存在于神经 组织中。在植物中如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有 G A B A， 且与植物的环境应激反应有关。 4-氨基丁酸（GABA）在碱性溶液中与次氯酸盐和*酚反应生成蓝绿色物质，通过检 测该有色物质在 645nm 波长处的值，即可得出样本中 GABA 的含量。 二、试剂盒的组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 40mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 10mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 20mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液枪、水浴锅、离心机、 研钵、蒸馏水。 四、γ-氨基丁酸（GABA）含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实 验样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中，加入 1mL 提取液，在冰上进行匀浆，12000rpm， 4℃或室温离心 10min，取上清液待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 645 nm，蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 样本 100 100 试剂一 60 660 试剂二 200 试剂三 400 混匀，沸水浴（95-100℃）10min，冰浴至室温，呈现蓝绿色颜本试剂盒仅供科研使用 2 色，若浑浊需 12000rpm 离心 5min，取全部澄清上清液转移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于 645nm 处读取各管的 A 值， △A=A 测定-A 对照（每个样本需做一个自身对照）。 【注】1.若测定管的 A 值大于 1，则需将样本进行稀释（用蒸馏水稀释），稀释倍数 D 需代入计算公式重新计算。 2.若 A 测定-A 对照的差值在零附近徘徊，则可增加样本取样量（如增至 0.2g）， 则取样质量 W 代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 0.0086x - 0.0033，x 为标准品质量(μg)，y 为吸光值ΔA。 2、按样本质量计算: GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(W×V1÷V)×D =1162.8×(ΔA+0.0033) ÷W×D 3、按细胞数量计算： GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷(500×V1÷V)×D=2.33×(ΔA+0.0033)×D 4、液体中 GABA 含量计算： GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0033) ÷0.0086]÷V1×D=1162.8×(ΔA+0.0033)×D V---提取液体积，1mL； V1---样本加入体积，0.1mL； D---稀释倍数,未稀释即为 1； W---样本取样质量； 500---细胞数量，万。 附：标准曲线制作过程： 1 标准品母液（2mg/mL）：标准品临用前加 1mL 蒸馏水溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL。也可根据实际样本来调整 标准品浓度。 3 按照测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。