查尔酮异构酶（CHI）试剂盒,微板法

查尔酮异构酶（CHI）试剂盒,微板法

查尔酮异构酶（CHI）试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)试剂盒说明书 （WS7001W 微板法 96 样） 一、产品简介： 查尔酮异构酶(CHI, EC 5.5.1.6)是个被认识的黄酮类化合物合成相关酶，也是黄 酮代谢途径中的关键酶之一。广泛存在于多种植物中，在植物的抗菌机制、抗胁迫、细 胞的发育和分化、色素的积累和外源基因的表达等方面起着重要的作用。 查尔酮异构酶(CHI)可使查尔酮形成二氢黄酮，通过检测查尔酮的初始降解速率进而 得出查尔酮异构酶的酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 15mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体×2 支 4℃保存 临用前离心或甩几下使试剂落入 底部，每支再分别加 0.7mL 乙醇 充分溶解，4℃保存。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、查尔酮异构酶（CHI）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上 清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，温度设定 30℃，调节波长至 380nm。 ② 试剂放在 30℃水浴 5min； ③ 按照下表在 96 孔板中依次加入试剂： 试剂名称（μL） 测定管 样本 40 试剂一 150 试剂二 10 混匀，30℃条件下，立即于 380nm 处读取吸光值 A1，10min 后读取 A2。 △A=A1-A2。 【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可延长反应时间 T（如：30min 或更长）， 或加大样本量 V1（如增至 80μL，则试剂一相应减少），重新 调整后的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、按样本蛋白浓度计算： 酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟吸光值变化 0.01 为一个酶活单位（U）。本试剂盒仅供科研使用 2 CHI（U/min/mg prot）＝(ΔA÷0.01)÷(V1×Cpr) ÷T=250×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算： 酶活单位定义：每克样本每分钟吸光值变化 0.01 为一个酶活单位（U）。 CHI（U/min/g 鲜重）＝(ΔA÷0.01)÷(W×V1÷V) ÷T=250×ΔA÷W V---加入提取液体积，1 mL； V1---加入样本体积，0.04 mL； T---反应时间，10 min； W---样本质量，g。 Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒；