游离胆gu醇(FC)含量试剂盒,微板法

游离胆gu醇(FC)含量试剂盒,微板法

游离胆gu醇(FC)含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 游离胆*醇（free cholesterol, FC）含量试剂盒说明书 （货号：WS1190W 微板法 96 样） 一、产品简介： 游离胆*醇（FC）不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸，维生* D 以及甾体激素 的原料。其血清浓度可作为脂代谢的指标。 游离胆*醇（FC）在胆*醇氧化酶作用下被氧化生成 4-胆甾烯酮和 H2O2；接着与 4- 氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物，其在 510nm处有特征吸收峰，通过检测 510nm 处吸光值即可得出 FC 含量。 二、试剂盒的组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 支 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，再 加 3.2mL 蒸馏水，充分震荡溶解 试剂二 液体 9mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 4℃保存 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。 四、游离胆*醇（FC）含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中，加入 1mL 提取液，在冰上进行匀浆，12000rpm， 4℃或室温离心 10min，取上清液待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 510 nm。 ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。 ③ 在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 标准品 40 样本 40 试剂一 30 30 30 试剂二 70 70 110本试剂盒仅供科研使用 2 试剂三 60 60 60 混匀，避光孵育 60min，于 510nm 处读取各管吸光值 A。 【注】若测定管的 A 值大于 1，则需将样本进行稀释（用提取液稀释）或减少样本加样量 V1（如减至 20μL， 则试剂二相应增加），稀释倍数 D 或样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、按样本质量计算 FC（μg/g 重量）=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =193.3×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算： FC（μg/104 cell）=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =0.39×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D 3、液体中 FC 含量计算： FC（μg/mL）=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =193.3×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) C 标准---0.5μmol/mL； Mr=386.6---胆*醇分子量； V1---样本加入体积，0.04mL； V2---标准品加入体积，0.04mL； V---提取液体积，1mL； D---稀释倍数； 500---细胞数量； W---样本取样质量。