甘油三酯(TG)含量试剂盒

甘油三酯(TG)含量试剂盒

甘油三酯(TG)含量试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 甘油三酯（triglyceride, TG）含量试剂盒说明书 （货号：WS0190F 分光法 48 样） 一、产品简介： 甘油三酯（TG）是三分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要 成分，也是重要呼吸底物。 甘油三酯（TG）被脂蛋白脂肪酶水解为甘油和游离脂肪酸。甘油接着被甘油激酶(GK) 的催化生成甘油-1-磷酸(G-1-P)。G-1-P 被甘油磷酸氧化酶(GPO)氧化生成过氧化氢 (H2O2)，(H2O2)与 4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物，其在 510nm 处有特征吸 收峰，通过检测 510nm 处吸光值即可得出 TG 含量。 二、试剂盒的组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 支 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，再加 2.2mL 蒸馏水，充分震荡溶解备用。 试剂二 液体 18mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 粉剂 mg×1 支 -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，再加 2.1mL 蒸馏水，充分震荡溶解备用。 试剂四 液体 12mL×1 瓶 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 4℃保存 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液枪、水浴锅、离心机、 研钵、蒸馏水。 四、甘油三酯（TG）含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中，加入 1mL 提取液，在冰上进行匀浆，12000rpm， 4℃或室温离心 10min，取上清液待测。 【注】：若组织样本为高脂样本或部分为高脂样本，需用无水乙醇进行提取。 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃或室温离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。 ③ 在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称（μL） 测定管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 标准品 60 样本 60 试剂一 40 40 40 试剂二 340 340 400 试剂三 40 40 40 试剂四 220 220 220 混匀，室温（25℃）避光孵育 20min，全部液体转移至 1mL 玻璃 比色皿（光径 1cm）中，于 510nm 处比色，读取各管 A 值。 【注】1. 若测定管的 A 值大于 0.5，则需将样本进行稀释（用提取液稀释）或减少样本加样量 V1（如 减至 40μL，则试剂二相应增加），稀释倍数 D 或样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 2. 若样本为血清，蛋黄（需用乙醇提取）等高 TG 样本，可把样本 V1 降为 10μL，另用 50μL 蒸馏水补齐，再按照上述加样表操作测定，则改变后的 V1 需带入公司计算。 3. 若样本自身含有高的甘油背景值或者含有高的抗氧化物质（如 VC 等），需要增设一个样本 自身对照（即 60μL+340μL 试剂二+40μL 试剂三+220μL 试剂四，避光反应 20min，510nm 读取吸光值 A），测定管减去对照管，代入计算公式计算。 五、结果计算： 1、按样本质量计算： TG(μg/g 重量)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =500×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算： TG(μg/104 cell)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D 3、液体中 TG 含量计算： TG(μg/mL)=(C 标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =500×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D TG(mmol/L)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1÷Mr×D =0.782×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---标品浓度，0.5mg/mL=500μg/mL； Mr---甘油三酯分子量，639； V---提取液体积，1mL； V1---样本加入体积，0.06mL； V2---标准品加入体积，0.06mL； D---稀释倍数，未稀释即为 1； 500---细胞数量； W---样本取样质量，g。