总胆gu醇(TC)含量试剂盒,微板法

总胆gu醇(TC)含量试剂盒,微板法

总胆gu醇(TC)含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 总胆*醇（total cholesterol，TC）含量试剂盒说明书 （货号：WS9090W 微板法 96 样） 一、产品简介： 总*固醇（TC）包括游离*固醇和胆*醇酯。是指组织中所有脂蛋白所含胆*醇之总和。 利用酯酶催化胆*醇酯水解生成游离胆*醇（FC），FC 在胆*醇氧化酶作用下被氧 化生成 4-胆甾烯酮和 H2O2；接着与 4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物，其在 510nm 处有特征吸收峰，通过检测 510nm 处吸光值即可得出 TC 含量。 二、试剂盒的组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 25mL×1 瓶 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 4℃保存 标准品浓度为 5.17mmol/L。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、乙醇、离心机、研钵、蒸馏水。 四、总胆*醇（TC）含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中，加入 1mL 乙醇，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃ 或室温离心 10min，取上清液待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 乙醇，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 510 nm。 ② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 样本 2.5 标准品 2.5 蒸馏水 2.5 试剂一 250 250 250 混匀，37℃孵育 10min，于 510nm 处读取各管吸光值 A。 【注】1.若测定管的 A 值大于 1，则需将组织或细胞样本用乙醇进行稀释（若是液体样本如血清需 用生理盐水或 PBS 或蒸馏水稀释），稀释倍数 D 需代入公式重新计算。 2.若 A 测定管值低于空白管，可增加样本加样体积 V1（如增至 5μL 或更多，则试剂一保 持不变，标准品仍为 2.5μL，额外加 2.5μL 蒸馏水补齐）；或增加样本取样质量 W（如增至 0.2g 或更多），则改变的 V1 和 W 则代入公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1、按样本质量计算： TC(μg/g 重量)=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =1998.7×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算： TC(μg/104 cell)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =4×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D 3、液体中 TC 含量计算： TC(μg/mL)=(C 标准×V2) ×Mr×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =1998.7×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D TC(mmol/L)=(C 标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =5.17×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---5.17mmol/L； Mr=386.6---胆*醇分子量； V1---样本加入体积，0.0025mL； V2---标准品加入体积，0.0025mL； V---提取液体积，1mL； D---稀释倍数，未稀释即为 1； 500---细胞数量，万； W---样本取样质量，g。