蛋白含量(SP)试剂盒(BCA法),微板法

蛋白含量(SP)试剂盒(BCA法),微板法

蛋白含量(SP)试剂盒(BCA法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书 (货号：WS8140F 分光法 96 样) 一、产品简介： BCA 蛋白含量试剂盒提供一种简单，快速，耐去污剂（最多 5％）的检测蛋白质浓度 的方法。由于蛋白质能将 Cu2+还原成 Cu+；BCA 可与 Cu+结合生成紫蓝色复合物，在 562nm 处有光吸光值，颜色的深浅与蛋白含量成正比，因此可根据吸光值测定蛋白质浓度。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂 A 液体 50mL×2 瓶 4℃保存 依据实验用量，临用前试剂 A:B=50:1 的比例混匀成反应 mix 试剂 B 液体 2mL×1 支 4℃保存 标准品 液体 1.5mL×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、恒温水浴锅、移液器。 四、蛋白含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液（提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水） 冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。 【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验前可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 ② 细菌或细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液； 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）， 12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。 【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如 10 倍。实验前可以先选 2 个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。 ③ 液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30min，调节波长到 562 nm，蒸馏水调零。 ② 反应 mix 置于 60℃水浴预热 30 min（仅煮一次即可）。 试剂名称（μL） 测定管 空白管（只做一次） 样本 20 蒸馏水 20 反应 mix 800 800 混匀，于 60℃保温 30min，全部转移到 1mL 玻璃比色皿 中，于 562nm 处测定吸光值 A，△A= A 测定-A 空白。 【注】：若△A﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 0.0687x - 0.0006；x 是标准品质量：μg，y 是△A。 2、Cpr (mg/g 鲜重)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷(V1÷V×W) ×D =0.728×(△A+0.0006) ÷W×D 3、Cpr (mg/mL)=[(△A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷V1×D=0.728×(△A+0.0006)×D 4、Cpr (μg/104 cell))=[(△A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=1.46×(△A+0.0006)×D V---提取液体积：1mL； V1---加入粗提液体积：0.02mL； W---样本质量：g； D---稀释倍数，未稀释即为 1； 500---细菌或细胞总数，万。 附：标准曲线制作过程： 1 标准品母液（500μg/mL）。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 2.5,5, 25, 50, 250, 500. μg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。