土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒,微板法

土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒,微板法

土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤半纤维素酶/土壤木聚糖酶试剂盒说明书 （货号：WS6230W 微板法 48 样） 一、产品简介： 半纤维素酶主要检测木聚糖酶活力，是将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总 称，广泛应用于酿造和饲料工业中。 土壤半纤维素酶在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴 条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的 深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，即可 计算该酶活力大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 100mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 15mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 20mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、常温离心机、空气浴（恒温震荡仪）、水浴锅。 四、土壤半纤维素酶活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min，调节波长至 540nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.3 0.3 试剂一 600 900 试剂二 300 充分混匀，40℃培养 6 小时（振荡培养或间隔一段时间手动振荡 混匀几下），12000rpm，25℃离心 10min，上清液待用 ③ 显色反应，在 EP 管中依次加入： 上清液 40 40 试剂三 200 200 混匀，沸水浴（95-100℃，可用封口膜缠紧，防止水分流失）5min 后，冷却至室温。 蒸馏水 800 800 混匀，若浑浊则 8000rpm 室温离心 5min，取 200μL 液体至 96 孔板中，于 540nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定管-A 空白管。 【注】：1.若ΔA 较小，可延长 40℃的孵育时间 T（如 24 小时或更长），或增加土样质量 W， 或增加③歩显色反应步骤中的上清液 V1（如由 40μL 增至 240μL 或更多，则蒸馏 水相应减少）。则改变后的 T 和 W 和 V1 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1，③歩显色反应步骤中的上清液可用蒸馏水稀释， 则稀释倍数 D 代入公式计算。 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y=7.5568x+0.0007，x 是标准品质量（mg），y 是△A。 2、酶活定义：PH4.8 条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生 1mg 还原糖所需的酶量为 一个酶活单位。 土壤半纤维素酶活力(mg/d/g 土样)=[(△A-0.0007)÷7.5568]×(V2÷V1)÷W÷T×D =12×(△A-0.0007)÷W×D V1---显色反应中上清液体积，40μL=0.04mL； V2---反应总体积，900μL=0.9mL； T---反应时间，1/4d； W---土壤样本质量，g； D---稀释倍数，未稀释即为 1。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天 内用且-20℃保存）。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 在显色反应阶段，按照测定管加样表操作，依据结果即可制作标准曲线。