土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)测试盒,微板法

土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)测试盒,微板法

土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)测试盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤亮*酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S-LAP） 试剂盒说明书 （货号:WS9230W 微板法 96 样） 一、产品简介： 土壤亮*酸氨基肽酶（LAP，EC 3.4.11.1）是一类能水解肽链 N-末端为亮*酸的酶， 由土壤微生物分泌。该酶活性变化与机体某些病理状态密切相关。 土壤亮*酸氨基肽酶（S-LAP）分解 L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，该物质在 405nm 有吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算 S-LAP 活性。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存条件 备注 试剂一 液体 120mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×2 支 -20℃保存 临用前甩几下，使试剂落入底 部，再加 2.7mL 乙醇混匀溶解。 试剂三 液体 70mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温振荡培养箱/水浴锅、可调式移液器、天平。 四、土壤亮*酸氨基肽酶（S-LAP）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实 验样本和试剂浪费！ 1、样本处理： 取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。 【注】土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 空白管（仅做一次） 土样（g） 0.05 0.05 试剂一 450 500 450 试剂二 50 50 充分混匀，37℃培养 1 小时（振荡培养或间隔 20min 手动振荡混匀 几下） 试剂三 300 300 300 混匀，8000rpm 离心 5min（若上清液不澄清可加大离心力），取 200μL 上清液至 96 孔板中，405nm 下读取吸光值 A，△A=A 测定- A 对照-A 空白（每个样本做一个自身对照）。 【注】：1.若ΔA 较小，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加土样质 量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。 2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。 则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管 和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 0.0078x - 0.0024；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为△A。 2、单位定义：每小时每克土样生成 1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 S-LAP(nmol/h/g 土样)=(ΔA+0.0024)÷0.0078÷W÷T×D=128.2×(ΔA+0.0024)÷W×D T---反应时间，1h； W---土壤样本实际取样量，g。 D---稀释倍数，未稀释即为 1。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（10μmol/mL）：临用前甩几下或离心，使粉体落入底部，加入 0.5mL 乙醇，涡旋震荡溶解后再加入 0.5mL 的蒸馏水混匀，得到 10μmol/mL 备用。 2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度：0,0.4,0.8,1.2,1.6, 2μmol/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 在 EP 管依次加入：50μL 标准品+450μL 试剂一+300μL 试剂三，混匀，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值，根据结果制作标准曲线。