土壤木质素过氧化物酶(S-Lip)试剂盒,微板法

土壤木质素过氧化物酶(S-Lip)试剂盒,微板法

土壤木质素过氧化物酶(S-Lip)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 土壤木质素过氧化物酶（Soil lignin peroxidase，S-Lip）试剂盒说明书 （货号：WS1330W 微板法 48 样） 一、产品简介： 木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解 酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制 等方面具有较大的应用潜力。 土壤木质素过氧化物酶（S-LiP）氧化藜芦醇生成藜芦醛，藜芦醛在 310nm 处有特征吸 收峰。通过测定 310nm 处的藜芦醛的增加速率，即可得到 S-LiP 酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 10mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体μL×1 瓶 4℃保存 临用前用前甩几下使液体落入底部，再 加 8.73mL 蒸馏水混匀备用。 试剂三 液体μL×1 支 4℃保存 临用前用前甩几下使液体落入底部，取 2 个新的 EP 管，每管取 3.3μL 液体，再 加 2mL 蒸馏水混匀备用。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板（UV 板）、天平、低温离心机、天平、空气浴/恒温震荡培养箱、甲苯。 四、土壤木质素过氧化物酶（S-Lip)活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： 1 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 310nm。 2 所有试剂至常温（25℃）状态。 3 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.1 0.1 甲苯 30 30 25℃静置 15min 试剂一 200 蒸馏水 200 试剂二 60 60 试剂三 40 40 30℃震荡（空气浴）反应 3h，12000rpm，4℃离心 10min，取上清 200μL 移至 96 孔板中，于 310nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定- A 对照（每个样本做一个自身对照）。 【注】若△A 值较低，可加大土壤样本量或者延长反应时间，则改变后的样本质量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算： 酶活性定义：每克土壤每天氧化 1nmol 藜芦醇生成藜芦醛所需的酶量为一个酶活力单位。 S-LiP 活性(nmol/d /g 土样)=(△A÷ε÷d)×109×V÷W÷T=567.7×△A÷W ε---藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm； d---比色皿光径，0.5cm； V---反应总体积，0.33mL=0.33×10-3L； W---样本质量，g； T---反应时间，3h=1/8d。