土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性试剂盒,微板法

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性试剂盒,微板法

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（S-α-Afa）活性测定试剂盒说明书 (货号:WS5430W 微板法 48 样) 一、产品简介： 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（S-α-Afa，EC 3.2.1.55）是一种能够水解非还原呋喃阿拉 伯糖残基的糖苷酶类。 本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，S-α-Afa分解对-硝基苯阿拉伯呋喃 糖苷生成对-硝基*酚（PNP），后者在405nm有吸收峰，通过测定吸光值升高速率即 可得出α-Afa酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 40mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部，再 加 15.5mL 试剂一，充分溶解备用。 试剂三 液体 20mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（S-α-Afa）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样或者 37 度烘箱风干（需先粗研磨），过 40 目筛网，备用。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 405 nm。 ② 在离心管中依次加入下列试剂： 【注】：1. 若 A 测定超过 1.8，可对最后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释（用水稀释即 可），稀释倍数 D 代入计算公式； 2.若ΔA 过小，可以增加土样量或延长保温时间（如：2h 或更长），重新调整的样本量 W 和反应 时间 T 需代入计算公式重新计算。 3. 若同时检测同一背景下的土壤样本，此批土壤样本可做一个样本自身对照，节省时间；若是不 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土壤（g） 0.1g 0.1g 试剂一 300 试剂二 300 迅速混匀，37℃保温 1h（间隔 15min 振荡混匀一次） 试剂三 200 200 混匀，12000rpm，离心 5min，立即取上清液 200μL 于 96 孔板中，立即于 405nm 下读取吸光值 A，△A= A 测定- A 对照（每个样本需做一个自身对照）。本试剂盒仅供科研使用 2 同背景下的土壤样本（如黑土，红土，黄土等），则每个样本需做一个自身对照，即按照说 明书加样表操作即可， 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 0.1292x - 0.0128；x 是标准品 PNP 质量（μg）， y 是△A。 2、活性定义：在 37℃，每小时每克土壤产生 1μg 对-硝基*酚（PNP）定义为 1 个酶活单位。 S-α-Afa(μg/h/g 土样)=[(△A+0.0128)÷0.1292]÷W÷T×D=7.74×(△A+0.0128)÷W×D W---土壤样品质量，g； D---稀释倍数，未稀释即为 1； T---催化反应时间，1 h； PNP 相对分子质量---139.11。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水溶解，若有结晶 析出，需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 在 EP 管中直接加入：10μL 标准品+290μL 试剂一+200μL 试剂三，混匀，立即取上 清液 200μL 于 96 孔板中，立即于 405nm 下读取吸光值 A。 4 根据结果制作标准曲线。