土壤几丁质酶试剂盒,微板法

土壤几丁质酶试剂盒,微板法

土壤几丁质酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤几丁质酶试剂盒说明 （货号：WS5330W 微板法 48 样） 一、产品简介： 多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶，土壤中几丁质酶主要水解几丁质多 聚体产生 N-乙酰氨基葡萄糖，该产物进一步与铁氰hua钾反应，于 420nm 处检测，进 而计算得到土壤几丁质酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 25mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部， 再加 3mL 盐酸充分混匀溶解后， 再加 3mL 蒸馏水混匀备用。 试剂三 粉体 mg×1 支 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部， 再加 1.2mL 蒸馏水溶解备用。 试剂四 液体 2mL×1 瓶 4℃保存 试剂五 液体 5mL×1 瓶 4℃保存 试剂六 粉体 g×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部， 再加 24mL 蒸馏水溶解备用。 标准品 粉剂×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、天平、水浴锅、低温离心机、盐酸、蒸馏水。 四、土壤几丁质酶活性测定： 1、样本制备： 取新鲜土样或 37℃烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网备用。 2、上机检测： ①酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.1g 0.1g 试剂一 200 300 试剂二 100 混匀，37℃（恒温培养箱）孵育 3h，4000rpm 离心 5min，取上清。 ③ 在 EP 管中依次加入： 上清液 150 150 试剂三 10 10 试剂四 15 15 混匀，37℃孵育 0.5h。 试剂五 50 50 混匀，4000rpm 离心 5min，取上清液待测。 ④在 EP 管中依次加入： 上清液 150 150本试剂盒仅供科研使用 2 试剂六 200 200 混匀，95-100℃煮沸 10min，若有沉淀，于 12000rpm 室温离心 5min， 取 200µL 上清液至 96 孔板中于 420nm 处读取各管吸光值 A， ΔA＝A 对照-A 测定（每个样本做一个自身对照）。 【注】若ΔA 较小，可以加大样本量（如增至 0.2g），或延长 37℃的孵育时间（由 3h 增加 至 5h 或更长），则改变后的样本重量 W 和反应时间 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算： 1、 标准曲线方程：y = 0.0417x + 0.0005，x 是标准品质量（μg），y 是ΔA。 2、按照样本重量计算: 酶活定义：每克土壤每小时分解几丁质产生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位。 土壤几丁质酶活性(μg/h/g 土壤)=[(ΔA-0.0005)÷0.0417×3]÷W÷T=24×(ΔA-0.0005)÷W T---反应时间，3h； W---样本质量，g； 3---体积系数； 标准品分子量---221.21； 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：标准品临用前加 2mL 蒸馏水，即为 1mg/mL。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。也可根据 实际样本来调整标准品浓度。 3 依据第④步骤的加样体系：150μL 标准品+200μL 试剂六，混匀，95-100℃煮沸 10min， 取 200µL 至 96 孔板中于 420nm 处读取各管吸光值 A，标准品的质量作为横坐标，0 mg/mL 对应的 A 值减去各浓度标准品对应的 A 之差作为纵坐标，即可得出标准曲 线。