Cy标记试剂各种花菁染料及其衍生物,常被应用于生物分子标记,荧光成像及其他荧光生物分析。它们广泛用于标记多肽、蛋白质和核酸等。储存条件:在低于-15℃温度下冷冻保存,要求储存环境干燥并避免光照。
Cy标记试剂的操作步骤:
1、在1L0.15MNaCl溶液中透析anti-GST抗体(浓度为0.5mLat3mg/mL),常温透析4小时。
2、在4°C用新鲜的1L0.15MNaCl溶液再透析过夜。
3、第二天用1L0.1MNaHCO3(pH8.3)透析4小时。
4、用0.22μm注射器过滤头过滤抗体溶液。
5、用0.1MNaHCO3稀释少量的抗体,在280nm处测其紫外吸收值计算标记抗体的总量。
6、用DMSO配置Cy3NHS(MW765.95)溶液浓度为10mg/mL;计算所需体积以得到想要的CyDyeNHS和抗体的比值(例如20:1),然后慢慢将其加入到抗体溶液中,同时在暗处常温缓慢搅拌45分钟。
7、用1L0.15MNaCl溶液常温避光透析4小时除去未标记上的Cy3。
8、在4°C用新鲜的1L0.15MNaCl溶液再避光透析过夜。
9、用1Lof0.01MPBS/0.01%Sodiumazide溶液常温避光透析4小时,在4°C常温避光再次透析过夜。
10、用0.22μm注射器过滤头过滤抗体溶液。
11、用0.01MPBS/0.01%Sodiumazide整数倍稀释标记抗体溶液,测量280nm(蛋白)和552nm(Cy)处的紫外可见吸光度。