在室温中对ecl超敏发光液进行实验操作要注意些什么
方法/步骤1:
常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。以下操作在室温进行。
方法/步骤2:
新鲜配制发光工作液。将BufferA和BufferB按1:1比率混合，制成发光工作液(每25px2膜需要0.125ml发光工作液)。转移到清洁的塑料小盒中。
方法/步骤3:
用镊子将漂洗过的膜取出，将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的洗液，但勿使膜*干燥。将膜转移至有发光工作液的塑料小盒中，使其*浸泡，轻轻摇晃，室温孵育几十秒到1分钟。
方法/步骤4:
用镊子将膜夹起5-10秒，并将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的发光液，迅速将膜*包裹于洁净保鲜膜内，去除气泡和褶皱，蛋白面朝上固定于X片暗盒内。
方法/步骤5:
在黑暗中一次重叠放入3张X光胶片，30分钟或更长时间后全部取出显影。
方法/步骤6:
对同一张膜进行多次蛋白杂交：用PBST或TBST洗涤掉发光液（10min×3次），然后从开始一抗杂交即可。
注意事项
优化一抗和二抗的比例
选择高质量的膜
ecl超敏发光液的注意事项
1.为获得*实验结果，请务必优化实验条件，包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择，并且发光液请现用现配。
2.建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20（终浓度为0.05%），以减少非特异性结合。
3.由于叠氮钠是HRP抑制剂，在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
4.免疫印迹实验进行全过程中，请确保印迹膜始终处于湿润状态，避免干燥。
5.在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子，避免蛋白污染。
6.实验过程中，请使用洁净器材。保证非金属设备没有明显划痕，金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。
以上便是今天关于在室温中对ecl超敏发光液进行实验操作要注意些什么的全部分享了，希望对大家今后使用本设备能有帮助。
